近期,河北大学生命科学学院杜会龙教授团队在Plant Communications上发表了最新研究成果,通过基因组、转录组和代谢组分析全面概述了基因家族扩张和四倍体化对大黄中丰富蒽醌含量的影响。

文章题目
The haplotype-resolved genome assembly of autotetraploid rhubarb Rheum officinale provides insights into the genome evolution and massive accumulation of anthraquinones
第一作者:Hongyu Zhang, Qiang He
通讯作者:Huilong Du
通讯单位:河北大学生命科学学院
杂志:Plant Communications
影响因子:10.5/Q1
文章链接:
https://doi.org/10.1016/j.xplc.2023.100677
研究背景
大黄(Rheum officinale)是大黄属/蓼科多年生草本植物,数千年来被列入许多经典中药配方中,含大黄的中成药有900多种,中国大黄年需求量约5500吨。大黄根粗,茎中空直立,基生叶大,叶片近圆形,种子宽卵形,枝上簇生有白绿色或紫红色的小花。大黄已被证明具有抗菌、抗病毒、免疫抑制、止血和抗肿瘤活性等非常重要的治疗潜力,且能消除充血。中国汉代(公元前202年-公元220年)时,大黄的药用价值首次被列在《神农本草》中。
药用大黄是《中国药法典》正式记载的大黄属中唯一报道的四倍体(2n=4x=44),因其活性成分丰富、品质优良、环境适应性强而被全球广泛使用。多倍性被假设为在进化过程中掩盖杂合的有害突变,可以创造新的表型性状和变异,促进优势表型和物种多样性的形成,从而有助于扩大其生态位,增加生物体应对环境变化的灵活性。先前的报道中已证明转座因子(TE)在植物基因组进化、基因表达调控和环境适应等方面发挥着重要作用。然而,目前尚不清楚大黄是同源四倍体还是异源四倍体,以及多倍体是否在其表型、物质生物合成和环境适应中发挥了重要作用。
大黄中含有丰富的蒽醌类、蒽酮类和苯乙烯类物质,使其具有抗菌、抗病毒、抗炎等特性,且这些代谢物的积累在不同发育阶段和不同组织中差异显著,然而目前蒽醌大量积累的遗传基础尚有待探究。
技术方案
基因组、转录组和代谢组联合分析
研究意义
目前已发表的同源四倍体基因组包括苜蓿、甘蔗、马铃薯和胡椒,在本研究之前还没有同源四倍体药用植物基因组的报道。作为同源四倍体药用植物基因组,研究为草本植物多倍体基础研究和农艺性状相关基因的鉴定提供了重要的基因组资源,有利于指导大黄的药物利用和高品质改良育种,也为研究TE多态性在长期进化背景下的功能效应和动态活性提供了重要参考。

▲大黄基因组组装及特征
研究通过PacBio HiFi、ONT和Hi-C等测序技术报道了一个7.68Gb大小的高质量染色体水平大黄基因组,Contig N50达3.47Mb,44条染色体分布在4个同源染色体类群中。

▲大黄比较基因组学及基因家族进化分析
比较基因组学分析表明,大黄中特定的扩张基因家族主要参与特殊代谢物的生物合成以及对生物/非生物胁迫的反应。TEs对山药代谢物生物合成、抗逆性和根系发育的基因组进化、基因拷贝数变异、基因调控和表达有重要作用。研究人员还发现了许多等位基因差异和等位基因特异性表达基因,可能是因为不同的TE插入到它们的调控区域所导致的。
转录组学和代谢组学分析表明,参与蒽醌途径的基因显著扩增,以及四倍体所带来的基因数量优势可能是大黄中蒽醌含量丰富的原因之一。此外,根中与蒽醌生物合成相关必需基因的高表达导致了根中蒽醌的含量远高于其他组织。

▲TEs对大黄基因组进化、基因拷贝数变异及基因表达的影响
近年来分子技术的进步促进了植物多倍体和多倍体基因组进化的进展。多倍体可以产生新的表型性状和大量的染色体水平变异,其中一些是通过选择而固定的,因为它们有助于多倍体物种对环境的适应。多倍体还可以引起基因表达和基因产物丰度的全基因组变化,药用大黄作为一种近期加倍的同源多倍体,对研究其与二倍体大黄的基因组进化、表型差异及药用物质组成差异具有重要价值。

▲同源四倍体形成及其在单倍体基因组间的分化
研究者们发现了几个潜在的与大黄代谢物的生物合成和根发育相关的基因,这些基因通过转座复制进行了显著扩增。经RT-qPCR验证发现,在根中表达量最高的Scaffold_103.6可能是大黄根茎发育的关键基因。研究结果表明,通过转座复制能够增加重要基因的数量,这些基因的表达可能为大黄的表型创新提供了遗传基础。

▲大黄代谢物及基因表达分析
代谢物可能是由邻近基因编码,研究人员鉴定了参与蒽醌生物合成途径的基因对和基因簇,发现基因簇倾向于位于Chr7和Chr10上,而基因对倾向于位于Chr1和Chr7上,这些基因簇或基因对可能是蒽醌生物合成的重要候选基因,特别是Chr7上的基因可能是代谢工程和有益分子异源重组的候选者。

▲参与蒽醌生物合成的基因