马铃薯遗传转化

Ø背景说明

马铃薯（Solanum tuberosum）是世界上最重要的块茎类粮食作物。与此同时，马铃薯作为第四大粮食作物，对我国乃至全球粮食安全的保障功不可没。

马铃薯8个栽培种，包括7个原始栽培种（近缘栽培种）和1个普通栽培种（现代栽培种）均属于马铃薯系（Tuberosa Rydb），均产于南美洲。7个原始栽培种为：窄刀种（S. stenotomum Juz. et Buk，2n=24）；阿江惠种（S. ajanhuiri Juz. et Buk，2n=24）；富利亚种（S. phureja Juz. et Buk，2n=24）；角萼种（S. goniocalyx Juz. et Buk，2n=24）；乔恰种（S. chaucha Juz. et Buk，3n=36）；优杰谱氏种（S. juzepczukii Juz. et Buk，3n=36）；短叶片种（S. curtilobum Juz. et Buk，5n=60）。在世界广泛裁培普通栽培种（现代栽培种）即马铃薯种（S. tuberosum），包括：马铃薯种安第斯亚种（S.tubersum ssp. andigena H.，4n=48）、马铃薯种马铃薯亚种（S. stuberosum ssp. tuberosum L.，4n=48）和新型栽培种（Neo-tuberosum）。其中，Desiree、陇薯7号、大西洋、青薯9号均属于普通栽培种，即为四倍体品种，其基因组的复杂以及高度杂合导致常规的育种方式很难得到有效的优良品种，通过基因工程对马铃薯进行品种改造是一种有效的方式。

Ø服务流程

Ø服务内容及说明

以叶片、茎段和试管薯作为转基因受体材料，用携带目标基因载体的农杆菌侵染受体材料，将T-DNA插入到基因组中，经过对应抗性的抗生素筛选，进一步分化并再生为转基因株系。

Ø备注

1）客户可直接提供构建好的马铃薯转化载体，也可委托我司进行相关载体构建服务

客户提供质粒要求： ·

浓度：80-100ng/μL； ·体积：≥10μL； ·质粒无降解

注：质粒出现降解会影响后续实验，运输过程中可加冰袋或干冰避免此类问题

客户提供大肠杆菌要求：

·大肠杆菌菌液或菌板均可。菌液：1年以内的菌液，加甘油保存；菌板：一周内活化的菌板

客户提供农杆菌要求：

·农杆菌菌液或菌板均可。菌液：1年以内的菌液，加甘油保存；菌板：一周内活化的菌板

注：推荐客户提供质粒，大肠杆菌和农杆菌在邮寄过程中很容易发生污染

2）客户自有品种需提供马铃薯无菌试管苗20株以上。

3）如客户提供的品种特殊，将增加实验时间，同时，需提供更多无菌苗，具体阳性苗数可根据客户的要求进行协商

4）我司默认提供独立T0代苗，以抗性基因PCR鉴定阳性结果作为结题标准；对于基因编辑苗我司提供阳性T0代苗，并提供具体的突变信息

Ø真核抗性筛选推荐

Kana>Hyg>Basta

Ø可转品种

二倍体：S.chacoense 、S.candolleanum

四倍体：Desiree、大西洋、陇薯7号、黑美人、青薯9号、陇薯8号、冀薯12号、陇薯10号、陇薯3号

Ø实验信息

在实验开始、结题关键节点系统会自动发送短信到申请人手机进行告知，实验过程中客户可以随时登录客户管理系统查看项目实时进展情况。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看，并永久保留。实验过程用到的菌株、载体、受体材料免费为客户保存半年后销毁

Ø实验结题标准

阳性对照有正确的条带且阴性对照无条带

Ø实验交付结果
1）每个标准转化按照以下表格提供PCR阳性鉴定株系（真核抗性基因），也可以根据客户要求提供任意数量的独立转化株系，多出部分根据实际情况进行收费

①胶图：白底胶图，条带单一，无杂带。阳性菌亮，阴性苗与阴性水不亮，阳性苗与阳性菌条带一致，检测苗子棵数正确

②检测表格完整：包含检测编号，阳性苗编号，阳性总数，阳性率

③检测引物、载体序列等信息完整

2）实验数据及图片
3）该项目的实验报告

Ø案例展示